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CARRO DE LA COMPRA

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Expresión y purificación de proteínas


En bacterias EN BACTERIAS
   
En células de insecto (Baculovirus) EN CÉLULAS DE INSECTO (BACULOVIRUS)
   
En células de mamífero EN CÉLULAS DE MAMÍFERO

Los diferentes sistemas de expresión que ofrece ProAlt permiten al cliente el desarrollo de un antígeno a su medida, conforme a sus aplicaciones específicas. Las características de los distintos sistemas de expresión condicionan la cantidad de proteína recombinante generada, su actividad biológica, estructura, modificaciones post-transduccionales y pureza, siendo por tanto clave la elección del sistema de expresión más adecuado para cada proteína particular.


Sistema de expresión Ventajas Desventajas
Bacteria
  • Bajo coste
  • Rapidez
  • Fácil manipulación y escalado
  • Posibilidad de error en el plegamiento de proteínas
  • Falta de modificaciones post-traslacionales
  • Uso diferente de codones
Baculovirus
  • Ambiente eucariótico
  • Alto nivel de expresión de genes recombinantes
  • Fácil escalado
  • Expresión discontinua
  • Menor rapidez y mayor coste que el sistema procariota
Células de mamífero
  • Nivel mayor de proteínas con procesamiento post-traslacional
  • Bajo rendimiento de proteínas
  • Menor rapidez y más coste que bacteria y baculovirus



En bacterias EN BACTERIAS

Servicio modular: todos los pasos, desde el clonaje hasta la purificación de la proteína recombinante de interés, están disponibles de manera independiente para ajustarse a los requerimientos específicos de cada cliente.


Solicitud del servicio de expresión bacteriano completo


Referencia Fase del Proyecto / Descripción Tiempo Estimado
ECO-01 Ia. Clonaje en un vector de expresión bacteriano (1 tag) 2 semanas
ECO-02 Ib. Clonaje en dos vectores de expresión bacterianos (2 tags)
ECO-03 Ic. Clonaje en tres vectores de expresión bacterianos (3 tags)
ECO-04 IIa. Ensayo de expresión a pequeña escala (1 tag) 1-2 semanas
ECO-05 IIb. Ensayo de expresión a pequeña escala (2 tags diferentes)
ECO-06 IIc. Ensayo de expresión a pequeña escala (3 tags diferentes)
MALDI Espectrometría de masas MALDI-TOF 1 semana
ECO-07 III. Producción a gran escala (1 a 5 litros de cultivo bacteriano) 3-5 días
ECO-08 IVa. Purificación de la proteína recombinante soluble 1 semana
ECO-09 IVb. Purificación de proteínas fusionadas a His insolubles

Tags: 6xHis; GST; MBP; others


NOTAS:


  • El cliente debe proporcionar el gen o DNA que contenga el 100% de la secuencia de la proteína que se quiere expresar (secuencia verificada que no contenga intrones, mutaciones, deleciones ni codones de parada o stop codons).
  • El cliente podrá solicitar y contratar a ProAlt la síntesis del gen, incluida la optimización de codones cuando se considere ventajosa para su expresión en un sistema concreto. En este caso deberá proporcionar la información de la secuencia completa a ProAlt quien se encargará de solicitar presupuesto y gestionar la síntesis-optimización del gen en forma de subcontratación, siendo el cliente final quien asuma los gastos.
  • ProAlt no garantiza en rendimiento ni el grado de pureza de la proteína recombinante generada puesto que ésta es una variable difícil de controlar que cambia de proteína a proteína y conforme al diseño experimental elegido por el cliente. Asimismo, los plazos indicados son aproximados, pudiendo sufrir modificaciones en función de la complejidad de cada proteína.
  • La ejecución del módulo ECO-08 o ECO-09 no puede ser elegida por el cliente de antemano, puesto que dependerá de que la proteína se exprese de forma soluble o insoluble (cuerpos de inclusión). ProAlt informará al cliente de los resultados obtenidos en el módulo ECO-04 antes de iniciar el módulo que corresponda.

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En células de insecto (Baculovirus) EN CÉLULAS DE INSECTO (BACULOVIRUS)

Servicio modular: todos los pasos, desde el clonaje hasta la purificación de la proteína recombinante de interés, están disponibles de manera independiente para ajustarse a los requerimientos específicos de cada cliente.


Solicitud del servicio de expresión en baculovirus completo


Referencia Fase del Proyecto / Descripción Tiempo Estimado
BCV-01 Ia. Clonaje en un vector de expresión de baculovirus (1 tag) 2 semanas
BCV-02 Ib. Clonaje en dos vectores de expresión de baculovirus (2 tags)
BCV-03 IIa. Generación de baculovirus recombinantes (1 tag) 2-3 semanas
BCV-04 IIb. Generación de baculovirus recombinantes (2 tags)  
MALDI Espectrometría de masas MALDI-TOF 1 semana
BCV-05 III. Amplificación de baculovirus recombinantes para stock de título elevado 1-2 semanas
BCV-06 IV. Optimización de la expresión 1-2 semanas
BCV-07 V. Producción a gran escala (500ml a 5 litros de células Sf9) 1 semana
BCV-08 VIa. Purificación de la proteína recombinante soluble 1 semana
BCV-09 VIb. Purificación de proteínas fusionadas a His insolubles

Tags: 6xHis and/or GST


NOTAS:


  • El cliente debe proporcionar el gen o DNA que contenga el 100% de la secuencia de la proteína que se quiere expresar (secuencia verificada que no contenga intrones, mutaciones, deleciones ni codones de parada o stop codons).
  • El cliente podrá solicitar y contratar a ProAlt la síntesis del gen, incluida la optimización de codones cuando se considere ventajosa para su expresión en un sistema concreto. En este caso deberá proporcionar la información de la secuencia completa a ProAlt quien se encargará de solicitar presupuesto y gestionar la síntesis-optimización del gen en forma de subcontratación, siendo el cliente final quien asuma los gastos.
  • ProAlt no garantiza en rendimiento ni el grado de pureza de la proteína recombinante generada puesto que ésta es una variable difícil de controlar que cambia de proteína a proteína y conforme al diseño experimental elegido por el cliente. Asimismo, los plazos indicados son aproximados, pudiendo sufrir modificaciones en función de la complejidad de cada proteína.
  • La ejecución del módulo BCV-08 o BCV-09 no puede ser elegida por el cliente de antemano, puesto que dependerá de que la proteína se exprese de forma soluble o insoluble (cuerpos de inclusión). ProAlt informará al cliente de los resultados obtenidos en el módulo BCV-06 antes de iniciar el módulo que corresponda.

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En células de mamífero EN CÉLULAS DE MAMÍFERO

Servicio modular: todos los pasos, desde el clonaje hasta la purificación de la proteína recombinante de interés, están disponibles de manera independiente para ajustarse a los requerimientos específicos de cada cliente.


Solicitud del servicio de expresión en mamíferos completo


Referencia Fase del Proyecto / Descripción Tiempo Estimado
MAM-01 I. Clonaje en vectores de expresión de mamíferos 2 semanas
MAM-02 II. Ensayo de expresión a pequeña escala 2 semanas
MALDI Espectrometría de masas MALDI-TOF 1 semana
MAM-03 III. Producción a media escala (108 células) 2 semanas
MAM-04a IVa. Purificación de la proteína recombinante soluble 2 semanas
MAM-04b IVb. Purificación de proteínas fusionadas a His insolubles 1 semana

Tags: 6xHis


Células: 293-EBNA y CHO-K1 (adherentes); 293 y CHO (suspensión).


NOTAS:


  • El cliente debe proporcionar el gen o DNA que contenga el 100% de la secuencia de la proteína que se quiere expresar (secuencia verificada que no contenga intrones, mutaciones, deleciones ni codones de parada o stop codons).
  • El cliente podrá solicitar y contratar a ProAlt la síntesis del gen, incluida la optimización de codones cuando se considere ventajosa para su expresión en un sistema concreto. En este caso deberá proporcionar la información de la secuencia completa a ProAlt quien se encargará de solicitar presupuesto y gestionar la síntesis-optimización del gen en forma de subcontratación, siendo el cliente final quien asuma los gastos.
  • ProAlt no garantiza en rendimiento ni el grado de pureza de la proteína recombinante generada puesto que ésta es una variable difícil de controlar que cambia de proteína a proteína y conforme al diseño experimental elegido por el cliente. Asimismo, los plazos indicados son aproximados, pudiendo sufrir modificaciones en función de la complejidad de cada proteína.
  • La ejecución del módulo MAM-04a o MAM-04b no puede ser elegida por el cliente de antemano, puesto que dependerá de que la proteína se exprese de forma soluble o insoluble (cuerpos de inclusión). ProAlt informará al cliente de los resultados obtenidos en el módulo MAM-02 antes de iniciar el módulo que corresponda.

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