Expresión y purificación de proteínas
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EN BACTERIAS |
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EN CÉLULAS DE INSECTO (BACULOVIRUS) |
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EN CÉLULAS DE MAMÍFERO |
Los diferentes sistemas de expresión que ofrece ProAlt permiten al cliente el desarrollo de un antígeno a su medida, conforme a sus aplicaciones específicas. Las características de los distintos sistemas de expresión condicionan la cantidad de proteína recombinante generada, su actividad biológica, estructura, modificaciones post-transduccionales y pureza, siendo por tanto clave la elección del sistema de expresión más adecuado para cada proteína particular.
| Sistema de expresión | Ventajas | Desventajas |
|---|---|---|
| Bacteria |
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| Baculovirus |
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| Células de mamífero |
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EN BACTERIAS |
Servicio modular: todos los pasos, desde el clonaje hasta la purificación de la proteína recombinante de interés, están disponibles de manera independiente para ajustarse a los requerimientos específicos de cada cliente.
Solicitud del servicio de expresión bacteriano completo
| Referencia | Fase del Proyecto / Descripción | Tiempo Estimado |
|---|---|---|
| ECO-01 | Ia. Clonaje en un vector de expresión bacteriano (1 tag) | 2 semanas |
| ECO-02 | Ib. Clonaje en dos vectores de expresión bacterianos (2 tags) | |
| ECO-03 | Ic. Clonaje en tres vectores de expresión bacterianos (3 tags) | |
| ECO-04 | IIa. Ensayo de expresión a pequeña escala (1 tag) | 1-2 semanas |
| ECO-05 | IIb. Ensayo de expresión a pequeña escala (2 tags diferentes) | |
| ECO-06 | IIc. Ensayo de expresión a pequeña escala (3 tags diferentes) | |
| MALDI | Espectrometría de masas MALDI-TOF | 1 semana |
| ECO-07 | III. Producción a gran escala (1 a 5 litros de cultivo bacteriano) | 3-5 días |
| ECO-08 | IVa. Purificación de la proteína recombinante soluble | 1 semana |
| ECO-09 | IVb. Purificación de proteínas fusionadas a His insolubles |
Tags: 6xHis; GST; MBP; others
NOTAS:
- El cliente debe proporcionar el gen o DNA que contenga el 100% de la secuencia de la proteína que se quiere expresar (secuencia verificada que no contenga intrones, mutaciones, deleciones ni codones de parada o stop codons).
- El cliente podrá solicitar y contratar a ProAlt la síntesis del gen, incluida la optimización de codones cuando se considere ventajosa para su expresión en un sistema concreto. En este caso deberá proporcionar la información de la secuencia completa a ProAlt quien se encargará de solicitar presupuesto y gestionar la síntesis-optimización del gen en forma de subcontratación, siendo el cliente final quien asuma los gastos.
- ProAlt no garantiza en rendimiento ni el grado de pureza de la proteína recombinante generada puesto que ésta es una variable difícil de controlar que cambia de proteína a proteína y conforme al diseño experimental elegido por el cliente. Asimismo, los plazos indicados son aproximados, pudiendo sufrir modificaciones en función de la complejidad de cada proteína.
- La ejecución del módulo ECO-08 o ECO-09 no puede ser elegida por el cliente de antemano, puesto que dependerá de que la proteína se exprese de forma soluble o insoluble (cuerpos de inclusión). ProAlt informará al cliente de los resultados obtenidos en el módulo ECO-04 antes de iniciar el módulo que corresponda.
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EN CÉLULAS DE INSECTO (BACULOVIRUS) |
Servicio modular: todos los pasos, desde el clonaje hasta la purificación de la proteína recombinante de interés, están disponibles de manera independiente para ajustarse a los requerimientos específicos de cada cliente.
Solicitud del servicio de expresión en baculovirus completo
| Referencia | Fase del Proyecto / Descripción | Tiempo Estimado |
|---|---|---|
| BCV-01 | Ia. Clonaje en un vector de expresión de baculovirus (1 tag) | 2 semanas |
| BCV-02 | Ib. Clonaje en dos vectores de expresión de baculovirus (2 tags) | |
| BCV-03 | IIa. Generación de baculovirus recombinantes (1 tag) | 2-3 semanas |
| BCV-04 | IIb. Generación de baculovirus recombinantes (2 tags) | |
| MALDI | Espectrometría de masas MALDI-TOF | 1 semana |
| BCV-05 | III. Amplificación de baculovirus recombinantes para stock de título elevado | 1-2 semanas |
| BCV-06 | IV. Optimización de la expresión | 1-2 semanas |
| BCV-07 | V. Producción a gran escala (500ml a 5 litros de células Sf9) | 1 semana |
| BCV-08 | VIa. Purificación de la proteína recombinante soluble | 1 semana |
| BCV-09 | VIb. Purificación de proteínas fusionadas a His insolubles |
Tags: 6xHis and/or GST
NOTAS:
- El cliente debe proporcionar el gen o DNA que contenga el 100% de la secuencia de la proteína que se quiere expresar (secuencia verificada que no contenga intrones, mutaciones, deleciones ni codones de parada o stop codons).
- El cliente podrá solicitar y contratar a ProAlt la síntesis del gen, incluida la optimización de codones cuando se considere ventajosa para su expresión en un sistema concreto. En este caso deberá proporcionar la información de la secuencia completa a ProAlt quien se encargará de solicitar presupuesto y gestionar la síntesis-optimización del gen en forma de subcontratación, siendo el cliente final quien asuma los gastos.
- ProAlt no garantiza en rendimiento ni el grado de pureza de la proteína recombinante generada puesto que ésta es una variable difícil de controlar que cambia de proteína a proteína y conforme al diseño experimental elegido por el cliente. Asimismo, los plazos indicados son aproximados, pudiendo sufrir modificaciones en función de la complejidad de cada proteína.
- La ejecución del módulo BCV-08 o BCV-09 no puede ser elegida por el cliente de antemano, puesto que dependerá de que la proteína se exprese de forma soluble o insoluble (cuerpos de inclusión). ProAlt informará al cliente de los resultados obtenidos en el módulo BCV-06 antes de iniciar el módulo que corresponda.
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EN CÉLULAS DE MAMÍFERO |
Servicio modular: todos los pasos, desde el clonaje hasta la purificación de la proteína recombinante de interés, están disponibles de manera independiente para ajustarse a los requerimientos específicos de cada cliente.
Solicitud del servicio de expresión en mamíferos completo
| Referencia | Fase del Proyecto / Descripción | Tiempo Estimado |
|---|---|---|
| MAM-01 | I. Clonaje en vectores de expresión de mamíferos | 2 semanas |
| MAM-02 | II. Ensayo de expresión a pequeña escala | 2 semanas |
| MALDI | Espectrometría de masas MALDI-TOF | 1 semana |
| MAM-03 | III. Producción a media escala (108 células) | 2 semanas |
| MAM-04a | IVa. Purificación de la proteína recombinante soluble | 2 semanas |
| MAM-04b | IVb. Purificación de proteínas fusionadas a His insolubles | 1 semana |
Tags: 6xHis
Células: 293-EBNA y CHO-K1 (adherentes); 293 y CHO (suspensión).
NOTAS:
- El cliente debe proporcionar el gen o DNA que contenga el 100% de la secuencia de la proteína que se quiere expresar (secuencia verificada que no contenga intrones, mutaciones, deleciones ni codones de parada o stop codons).
- El cliente podrá solicitar y contratar a ProAlt la síntesis del gen, incluida la optimización de codones cuando se considere ventajosa para su expresión en un sistema concreto. En este caso deberá proporcionar la información de la secuencia completa a ProAlt quien se encargará de solicitar presupuesto y gestionar la síntesis-optimización del gen en forma de subcontratación, siendo el cliente final quien asuma los gastos.
- ProAlt no garantiza en rendimiento ni el grado de pureza de la proteína recombinante generada puesto que ésta es una variable difícil de controlar que cambia de proteína a proteína y conforme al diseño experimental elegido por el cliente. Asimismo, los plazos indicados son aproximados, pudiendo sufrir modificaciones en función de la complejidad de cada proteína.
- La ejecución del módulo MAM-04a o MAM-04b no puede ser elegida por el cliente de antemano, puesto que dependerá de que la proteína se exprese de forma soluble o insoluble (cuerpos de inclusión). ProAlt informará al cliente de los resultados obtenidos en el módulo MAM-02 antes de iniciar el módulo que corresponda.
